PENGARUH EKSTRAK MENGKUDU TERHADAP KADAR MDA DARAH

DAN AKTIVITAS KATALASE TIKUS DM YANG DIINDUKSI ALOKSAN

Husnil Kadri

ABSTRAK

Diabetes Melitus (DM) yang tidak terkontrol dengan baik dapat menyebabkan terjadinya stres oksidatif. Stres oksidatif adalah keadaan dimana produksi radikal bebas melebihi kemampuan antioksidan dalam tubuh untuk meredamnya. Produksi radikal bebas yang berlebihan menyebabkan kerusakan oksidatif yang dapat terjadi pada lipid, protein dan DNA. Untuk mengantisipasi efek radikal bebas pada DM dan kemungkinan terjadinya komplikasi, maka diperlukan tambahan antioksidan eksogen. Salah satu tanaman yang mengandung bahan aktif antioksidan adalah mengkudu (Morinda citrifolia linn). Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh pemberian ekstrak mengkudu terhadap kadar MDA darah dan aktivitas katalase tikus yang menderita diabetes melitus akibat pemberian aloksan.

Penelitian eksperimental ini menggunakan 12 ekor tikus putih dengan berat badan 200-250 gram yang dibagi menjadi tiga kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif (hanya diberi makan dan minum), kelompok kontrol positif (makan dan minum,serta diinduksi aloksan), kelompok perlakuan (makan dan minum, diinduksi aloksan, dan diberi ekstrak mengkudu (500 mg/kg BB/hari) selama 12 hari. Data yang diperoleh dianalisa secara statistik dengan uji Anova dengan derajat kepercayaan 95 %.

Hasil penelitian menunjukkan rata-rata kadar MDA darah kelompok kontrol negatif (4,261±0,427 nmol/ml), kelompok kontrol positif (5,605±0,391 nmol/ml), kelompok perlakuan (4,261±0,427 nmol/ml) dan rata-rata aktivitas katalase kelompok kontrol negatif (6,580±0,277 unit/mg), kelompok kontrol positif (4,954±0,485 unit/mg), kelompok perlakuan (6,314±0,651 unit/mg). Hasil penelitian tersebut menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna pada rata-rata kadar MDA darah dan aktivitas katalase tikus pada ketiga kelompok penelitian (p<0,05), sehingga dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak mengkudu berpengaruh terhadap kadar MDA darah dan aktivitas katalase tikus DM yang diinduksi aloksan.

I.PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

dari ekor Pola penyakit di Indonesia selama kurun waktu 60 tahun merdeka telah mengalami perubahan. Penyakit infeksi dan kekurangan gizi berangsur turun sedangkan penyakit degeneratif, di antaranya diabetes meningkat dengan tajam. Perubahan pola penyakit itu berhubungan dengan cara hidup yang berubah. Pola makan tradisional yang mengandung banyak karbohidrat dan serat dari sayuran beralih ke pola makan siap saji. Di samping itu cara hidup yang sibuk dengan pekerjaan menyebabkan kurangnya kesempatan untuk berolahraga. Pola hidup berisiko seperti inilah yang menyebabkan tingginya kekerapan penyakit jantung koroner, hipertensi, diabetes, dan hiperlipidemia.(Slamet S, 2006).

Diabetes Melitus adalah suatu sindrom yang ditandai hiperglikemia dengan gangguan metabolisme karbohidrat, protein, dan lemak yang disebabkan oleh defisiensi absolut atau relatif dari sekresi insulin dan atau diduga seseorang menderita diabetes melitus bila ditemukan keluhan yang khas seperti polifagi, polidipsi, poliuria dan berat badan yang menurun (Swa K, 2004).

Penderita diabetes melitus di dunia dari tahun ke tahun semakin meningkat. Menurut WHO, pada tahun 2000 jumlah penderita diabetes melitus di dunia mencapai 171 juta jiwa. Pada tahun 2030, jumlah penderita diabetes melitus di dunia diperkirakan meningkat menjadi 366 juta jiwa. Penderita diabetes melitus di Indonesia pada tahun 2000 mencapai 8.426.000 jiwa. Pada tahun 2020, diperkirakan jumlahnya meningkat menjadi 21.257.000 jiwa. (WHO, 2001).

Hiperglikemia pada diabetes melitus terlibat dalam pembentukan radikal bebas. Hiperglikemia menyebabkan autooksidasi glukosa, glikasi protein, dan aktivasi jalur metabolisme poliol yang selanjutnya mempercepat pembentukan senyawa oksigen reaktif. Pembentukan senyawa oksigen reaktif tersebut dapat meningkatkan modifikasi lipid, DNA, dan protein pada berbagai jaringan. Modifikasi molekuler pada berbagai jaringan tersebut mengakibatkan ketidakseimbangan antara antioksidan protektif (pertahanan antioksidan) dan peningkatan produksi radikal bebas. Hal ini merupakan awal kerusakan oksidatif yang dikenal sebagai stres oksidatif. Dampak negatif pada membran sel akan terjadi reaksi rantai yang disebut peroksidasi lipid. Akibat akhir dari rantai reaksi ini adalah terputusnya rantai asam lemak menjadi berbagai senyawa yang toksik terhadap sel, antara lain Malondialdehid (MDA), etana, dan pentana (Purnomo S,2000).

Untuk meredam kerusakan oksidatif tersebut diperlukan antioksidan (Bambang S dan Eko S, 2005). Antioksidan adalah senyawa-senyawa yang dapat meredam dampak negatif oksidan (Purnomo S,2000). Berdasarkan sumbernya, antioksidan ada 2, yaitu antioksidan endogen dan antioksidan eksogen. Antioksidan endogen berasal dari dalam tubuh sendiri, terdiri dari Super Oksida Dismutase (SOD), glutation peroksidase, dan katalase. Antioksidan eksogen diperoleh dari luar melalui makanan yang kita makan untuk membantu tubuh melawan kelebihan radikal bebas dalam tubuh. Peningkatan suplai antioksidan yang cukup akan membantu pencegahan komplikasi klinis diabetes melitus (Bambang S dan Eko S, 2005).

Mengkudu (Morinda Citrifolia linn) adalah salah satu tanaman obat tradisional yang mengandung bahan aktif antioksidan (Eko S,Bambang S, Edyson, dkk., 2005). Mengkudu mengandung Selenium yang berfungsi penting untuk mengaktifkan glutation peroksidase, yaitu salah satu enzim yang sangat penting dalam tubuh yang menetralisir radikal-radikal bebas, terutama yang menyerang molekul lemak. (Purbaya JR, 2002; Kusnindar A dan Mitra R, 2003). Mengkudu juga mengandung vitamin A dan vitamin C. Selain itu, mengkudu juga mengandung berbagai komponen aktif yang penting bagi tubuh, seperti senyawa-senyawa terpenoid, damnacanthal, xeronine, proxeronine, anthraquinone, dan scopoletin (Christina W, 2005).

Beberapa peneliti telah melakukan pengujian aktivitas antioksidan buah mengkudu. Hasil penelitian Wang dan Su (2001) membuktikan bahwa jus mengkudu sangat potensial untuk menghambat radikal bebas. Aktifitas antioksidan jus mengkudu 2,80x lebih kuat dari vitamin C, 1,40x lebih kuat dari pikogenol, dan 1,10x lebih kuat dari biji anggur (Christina W, 2005). Penelitian Eko Suhartono dkk pada tahun 2005 membuktikan bahwa jus buah mengkudu mampu menurunkan laju pembentukan AGEs (Advanced Glycation End Products) dan berperan sebagai senyawa antioksidan. Aktifitas antioksidan jus buah mengkudu konsentrasi 0,25 g/ml adalah 125,46 ± 27,79 %. (Eko Suhartono dkk, 2005). Penelitian yang dilakukan Suweino dkk membuktikan bahwa pemberian sari mengkudu secara oral dapat melindungi hati tikus dari kerusakan akibat stres oksidatif pada keracunan CCl

. (Suweino,Parwati A,Nur A,dkk., 2004).

Berdasarkan latar belakang di atas, maka penulis ingin mengetahui bagaimana pengaruh pemberian ekstrak mengkudu terhadap kadar MDA darah dan aktivitas katalase tikus yang diinduksi aloksan. MDA terbentuk dari peroksidasi lipid pada membran sel. Katalase adalah enzim antioksidan yang secara spesifik mengkatalisis dekomposisi hidrogen peroksida (Sulistyowati T, 2000). Pemeriksaan kadar MDA darah menggunakan metode Placer, Cushman, dan Johnson. Aktivitas katalase memakai metode kalorimetrik dengan menggunakan alat Spektrofotometer “Spectronic 21”.

II.METODE PENELITIAN

4.1. Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Andalas Padang, Laboratorium Farmakologi dan Laboratorium Kimia Bahan Alam jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Andalas Padang

4.2. Jenis Penelitian

Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimental dengan tikus sebagai hewan coba.

4.3. Sampel dan Besar Sampel

Sampel dari penelitian ini adalah tikus putih sebanyak 12 ekor yang dipilih secara acak yang terdiri dari tikus jantan dan betina dengan berat badan berkisar 200-250 gram. Besar sampel ditentukan dengan rumus menurut Fraenkle and Wallen.

(np - 1) – (p - 1) ³ p

Di mana : p = jumlah kelompok hewan coba

n = jumlah hewan coba tiap kelompok

(np - 1) – (p - 1) ³ p

(n.3 - 1) – (3 - 1) ³ 3

(3n - 1) – 2 ³ 9

3n ³ 12

n ³ 4

4.4. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional

4.4.1. Variabel Penelitian

Variabel bebas : Pemberian ekstrak mengkudu

Variabel Tergantung : Kadar MDA darah

Aktivitas katalase

4.4.2. Definisi Operasional

· Aloksan (2,4,5,6 Tetra oksipirimidin 5,6 dioksiurasil) merupakan bahan kimia yang digunakan untuk menginduksi diabetes pada binatang percobaan. Dosis aloksan yang digunakan untuk menginduksi diabetes tergantung kepada spesies percobaan. Penelitian ini menggunakan aloksan dengan dosis 150 mg/kg berat badan secara intraperitoneal.

· Ekstrak mengkudu dibuat dari buah mengkudu segar yang melalui tahapan tertentu sehingga didapatkan ekstrak mengkudu yang kental. Ekstrak mengkudu ini disuspensikan dalam Na CMC 1 % kemudian diberikan secara oral ke tikus dengan dosis 500 mg/kg BB/hari.

· Malondialdehid (MDA) adalah salah satu senyawa yang dihasilkan oleh pemecahan lipid peroksida

· Aktifitas katalase dinyatakan sebagai banyaknya H

(dalam mikromol) yang dihancurkan oleh katalase per menit dalam 1 mg/ml protein.

4.5. Alat dan Bahan

4.5.1. Alat-alat

· seperangkat tempat pemeliharaan tikus

· sonde oral

· timbangan

· seperangkat alat bedah minor

· spektrofotometer

· sentrifus

· seperangkat tabung reaksi

· water bath

· pipet

· vortex

· seperangkat alat destilasi vakum

· rotary evaporator

· blender

4.5.2. Bahan-bahan

· makanan standar

· buah mengkudu

· etanol 96 %

· serum sampel

· Na-thio barbiturate acid (Na-TBA) 1 %

· Larutan tris TCA 100%

· HCL 1 M

· Aquades

· H

0,2 M

· Larutan Buffer Fosfat pH 7

· Potassium dikromat 5 %

· Asam asetat glacial

· Larutan Kingsley

4.6. Prosedur Kerja

4.6.1. Persiapan alat dan bahan

4.6.2. Persiapan hewan percobaan

Sebelum perlakuan, 12 ekor tikus terlebih dahulu diaklimatisasi dalam kondisi laboratorium selama satu minggu dengan diberi makan yang cukup. Pada hari terakhir, diukur kadar glukosa darah puasa. Tikus yang dipilih adalah tikus yang mempunyai kadar gula darah normal (90-110 mg/dl). Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan dengan menggunakan glucose meter (gluco-DR). Darah diambil tikus.

4.6.3. Pembuatan ekstrak mengkudu

Buah mengkudu segar diiris-iris dengan pisau, dihaluskan dengan blender. Kemudian buah mengkudu dimaserasi dengan etanol 96 % sampai semuanya terendam. Diaduk sekali-sekali dan dibiarkan selama 5 hari kemudian disaring dan ampasnya dimaserasi lagi. Perlakuan ini dilakukan secara berulang sebanyak tiga kali yang masing-masingnya selama 5 hari. Semua filtrat disatukan, kemudian didestilasi vakum dan hasil destilat dikentalkan dengan menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental (Nasir,SM,1998)

4.6.4. Perencanaan dosis

A. Aloksan 150 mg/kg BB

B. Ekstrak mengkudu 500 mg/kg BB/hari

4.6.5. Perlakuan pada hewan coba

12 ekor tikus yang mempunyai kadar gula darah puasa normal dibagi menjadi tiga kelompok yaitu :

· Kelompok I (Kontrol negatif) tikus tidak diinduksi aloksan dan tidak diberi ekstrak mengkudu hanya diberi makan dan minum.

· Kelompok II (Kontrol positif) tikus diinduksi aloksan secara intraperitoneal dengan dosis 150 mg/kg BB dan tidak diberi ekstrak mengkudu

· Kelompok III (Perlakuan) tikus diinduksi aloksan secara intraperitoneal dengan dosis 150 mg/kg BB dan diberi ekstrak mengkudu secara oral dengan dosis 500mg/kg BB

Khusus untuk kelompok II dan III beberapa hari setelah penginduksian aloksan segera dilakukan pemeriksaan kadar glukosa darah karena pemberian ekstrak mengkudu dilakukan jika kadar glukosa darah tikus di atas 200 mg/dl (5 –6 hari). Ekstrak mengkudu yang diberikan mempunyai dosis 500 mg/kg BB per oral selama 12 hari (Kelompok III). Sedangkan untuk pengukuran kadar MDA darah dan uji aktivitas katalase dilakukan pada hari terakhir penelitian.

4.7. Kerangka Operasional Penelitian

4.8. Pemeriksaan Kadar MDA Darah

Pemeriksaan kadar MDA darah menggunakan metode Placer, Cusman, dan Johnson dengan uji Thio Barbiturat Acid (TBA) dan pembacaannya dengan menggunakan Spektrofotometer “Spectronic 21” pada panjang gelombang 532 nm .Cara Kerja :

1. Ambil darah tikus 5 cc kemudian sentrifugasi selama 15 menit (1000 rpm).

2. Serum sampel dipipet 1 cc dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi 10 ml.

3. Tambahkan 100 ml TCA 100 %, lalu divortex.

4. Tambahkan 250 mL HCL 1 M, lalu divortex dan sentrifugasi selama 15 menit (500 rpm).

5. Ambil supernatannya dan tambahkan Na-Thio 100 ml, lalu divortex.

6. Kemudian masukkan ke dalam water bath 100 derajat Celcius selama 20 menit.

7. Angkat dan biarkan dingin dalam suhu kamar.

8. Baca dengan spektrofotometer “Spectronic 21” pada panjang gelombang 532 nm.

4.9. Uji Aktivitas Katalase

Uji ini disebut metode Kalorimetrik dengan menggunakan warna sebagai indikator .

Satu unit aktivitas katalase dinyatakan sebagai banyaknya H

(dalam mikromol) yang dihancurkan oleh katalase per menit dalam tiap 1 mg/ml protein.

Reagen :

· Campuran 50 ml Potassium dichromate 5 % dengan 150 ml Asetat glacial

· H

0,2 M

· 250 ml Buffer Phospat pH 7 dengan konsentrasi 0,01 M

Pembuatan Kurva Standar :

Isilah 9 tabung dengan H

dengan jumlah yang berbeda-beda (10 sampai 160 micromol). Pada tiap tabung ditambahkan 2 ml dichromate/asetat glacial, bila terbentuk presipitat biru maka lakukan hal berikut :

1. Panaskan tiap tabung selama 10 menit di dalam air mendidih pada water bath untuk mendekomposisi presipitat biru hingga muncul warna hijau dari chromic asetat.

2. Dinginkan pada suhu kamar, dan tambahkan pada tiap tabung H

O hingga volumenya mencapai 3 ml.

3. Pindahkan 3 ml larutan tersebut ke dalam cuvete dan ukur absorbannya pada panjang gelombang 570 nm. Ulangi pada lima tabung lainnya.

4. Gunakan data tersebut untuk membuat grafik dengan absorban pada sumbu Y dan konsentrasi H

pada sumbu X

Pengujian :

1. Masukkan 800 mikromol (0,0008 mol) H

ke dalam tabung. Ini sama dengan 4 ml larutan H

0,2 M

2. Tambahkan 5 ml buffer Phospat

3. Tambahkan 1 ml serum dan homogenkan dengan perlahan.

4. Ambil 1 ml dari hasil reaksi ini, dan tambahkan ke dalam 2 ml dichromate/asetat glacial. Dengan tabung yang berbeda ulangi prosedur ini dengan interval 60 detik.

5. Panaskan tabung selama 10 menit pada air mendidih untuk menghilangkan presipitat biru dan menghasilkan larutan hijau.

6. Ukur absorban pada panjang gelombang 570 nm.

7. Gunakan kurva standar untuk menentukan berapa banyak H

yang tersisa di dalam serum saat reaksi dihentikan oleh asam asetat.

8. Setelah didapatkan jumlah H₂O₂ (mikromol) yang tersisa, maka untuk mendapatkan berapa banyak H₂O₂ yang telah dihancurkan oleh katalase adalah: H₂O₂ yang direaksikan (800 mikromol)-H₂O₂ yang tersisa.

Aktivitas katalase (unit/mg) = H₂O₂ yang dihancurkan katalase/menit

Kadar Protein serum (mg/ml)

Penentuan Kadar Protein

1. Masukkan 0,005 ml serum ke dalam tabung reaksi.

2. Tambahkan 3 ml larutan Kingsley dan homogenkan dengan perlahan dan dibiarkan pada suhu kamar selama 15 menit.

3. Setelah 15 menit, baca absorbannya pada panjang gelombang 536 nm.

4. Lakukan juga prosedur ini pada serum standar yang telah diketahui kadar proteinnya sebagai perbandingan.

5. Absorban yang didapat dimasukkan ke dalam rumus :

Kadar protein sampel = A sampel x Kadar protein standar (mg/ml)

A standar

4.10. Pengolahan dan Analisa Data

Data yang diperoleh diolah dan dianalisis dengan Anova dengan derajat kepercayaan 95 %. Jika terdapat perbedaan bermakna antara ketiga kelompok perlakuan (p< 0,05), maka dilanjutkan dengan Post Hoc Test.

i. HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1. Hasil

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya pengaruh pemberian ekstrak mengkudu terhadap kadar MDA darah dan aktivitas katalase tikus DM yang diinduksi aloksan. Sampel dibagi dalam tiga kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif yang hanya diberi makan dan minum, kelompok kontrol positif yang diinduksi aloksan, dan kelompok perlakuan yang diinduksi aloksan dan diberi ekstrak mengkudu 500 mg/kg BB selama 12 hari. Pada penelitian ini juga dilakukan pemeriksaan kadar glukosa darah puasa tikus yang dapat dilihat pada Lampiran 1.

Hasil yang diperoleh pada pengukuran kadar MDA darah dan pengujian aktivitas katalase adalah sebagai berikut :

Tabel 3.1. Kadar MDA Darah Tikus pada Ketiga Kelompok Penelitian

No	Kadar MDA Darah (nmol/ml)			p
No	Kontrol Negatif	Kontrol Positif	Ekstrak Mengkudu	Value
1	3,77	5,265	4,127	0,003
2	4,038	6,112	5,042
3	4,594	5,332	4,662
4	4,64	5,71	4,885
Rata-rata	4,261	5,605	4,679
SD	0,427	0,391	0,4

Berdasarkan tabel di atas tampak bahwa kadar rata-rata MDA darah kelompok kontrol negatif adalah 4,261±0,427 nmol/ml, kadar rata-rata MDA darah kelompok kontrol positif adalah 5,605±0,391 nmol/ml, dan kadar rata-rata MDA darah kelompok perlakuan (ekstrak mengkudu) adalah 4,679±0,399 nmol/ml. Berdasarkan analisis statistik Anova pada ketiga kelompok penelitian dengan derajat kepercayaan 95 % didapatkan p = 0,003 (p<0,05). Hasil ini menunjukkan terdapat perbedaan bermakna antara ketiga kelompok penelitian. Oleh sebab itu, analisis statistik dapat dilanjutkan dengan Post Hoc Tests Multiple Comparison (Tukey HSD). Hasilnya dapat dilihat pada tabel 5.2 berikut ini.

Tabel 3.2. Tingkat Kemaknaan Hasil Uji Tukey HSD terhadap Kadar MDA Darah Tikus

Kelompok	Kelompok	Perbedaan rata-rata	Standar Error	Probabilitas (p)
Kontrol negatif	Kontrol positif Perlakuan	-1.344025* -.418250	. 2872020 . 2872020	.003 .355
Kontrol positif	Kontrol negatif Perlakuan	1.344025* .925775*	. 2872020 .2872020	.003 .026
Perlakuan (ekstrak mengkudu)	Kontrol negatif Kontrol positif	.418250 -.925775*	. 2872020 . 2872020	.355 .026

(α = 95 %, p < 0,05, *terdapat perbedaan bermakna)

Berdasarkan tabel 5.2. tampak bahwa terdapat perbedaan bermakna antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok kontrol positif (p<0,05) dan kelompok kontrol positif dengan kelompok perlakuan (p<0,05).

Tabel3.3. Aktivitas Katalase Tikus pada Ketiga Kelompok Penelitian

No	Aktifitas Katalase (unit/mg)			p
	Kontrol Negatif	Kontrol Positif	Ekstrak Mengkudu	Value
1	6,331	5,551	6,453	0,003
2	6,951	4,625	5,367
3	6,412	5,138	6,843
4	6,625	4,5	6,594
Rata-rata	6,58	4,954	6,314
SD	0,277	0,485	0,651

Berdasarkan tabel 5.3 di atas tampak bahwa rata-rata aktivitas katalase kelompok kontrol negatif adalah 6,580 ± 0,277 unit/mg, rata-rata aktivitas katalase kelompok kontrol positif adalah 4,954 ± 0,485 unit/mg, dan rata-rata aktivitas katalase kelompok perlakuan (ekstrak mengkudu) adalah 6,314 ± 0,651 unit/mg. Berdasarkan analisis statistik Anova pada ketiga kelompok penelitian dengan derajat kepercayaan 95 % didapatkan p = 0,003 (p<0,05). Hasil ini menunjukkan terdapat perbedaan bermakna antara ketiga kelompok penelitian. Oleh sebab itu, analisis statistik dapat dilanjutkan dengan Post Hoc Tests Multiple Comparison (Tukey HSD). Hasilnya dapat dilihat pada tabel 5.4. berikut ini.

Tabel 3.4. Tingkat Kemaknaan Hasil Uji Tukey HSD terhadap Aktivitas Katalase Tikus

Kelompok	Kelompok	Perbedaan rata-rata	Standar Error	Probabilitas (p)
Kontrol negatif	Kontrol positif Perlakuan	1.625953* .265111	.3502248 .3502248	.019 .737
Kontrol positif	Kontrol negatif Perlakuan	-1.625953* -1.360842*	.3502248 .3502248	.003 .009
Perlakuan (ekstrak mengkudu)	Kontrol negatif Kontrol positif	-.265111 1.360842*	.3502248 .3502248	.737 .009

(α = 95 %, p < 0,05, *terdapat perbedaan bermakna)

Berdasarkan tabel 5.3. di atas tampak bahwa terdapat perbedaan bermakna antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok kontrol positif (p<0,05) dan kelompok kontrol positif dengan kelompok perlakuan (p<0,05).

3.2. PEMBAHASAN

Diabetes melitus yang tidak dikontrol dengan baik dapat menyebabkan stres oksidatif, dimana produksi radikal bebas (oksidan) yang melebihi kemampuan antioksidan tubuh untuk meredamnya (Syafril S, 2000). Kerusakan oksidatif akan membentuk hasil akhir berupa MDA, 9-hidroksi nonenal, peroksida, dan bermacam-macam senyawa hidrokarbon yang toksik terhadap sel (Suryohudoyo, 2000). MDA merupakan salah satu produk final dari lipid peroksida dan parameter yang mudah terdeteksi.

Penelitian yang dilakukan terhadap 12 ekor tikus dan dibagi menjadi 3 kelompok , yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif DM akibat pemberian aloksan, dan kelompok yang menderita DM akibat pemberian aloksan yang diberikan ekstrak mengkudu (500 mg/kgBB) secara oral selama 12 hari berturut-turut.

Berdasarkan pada tabel 5.1. tampak bahwa kadar rata-rata MDA darah kelompok kontrol negatif adalah 4,261±0,427 nmol/ml dan kelompok kontrol negatif merupakan kelompok dengan kadar rata-rata MDA darah terendah. Hal ini menunjukkan kadar MDA darah dalam batas normal karena pada kelompok ini tikus tidak diberi perlakuan. Berdasarkan tabel 5.3. rata-rata aktivitas katalase kelompok kontrol negatif adalah 6,580 ± 0,277 unit/mg dan merupakan rata-rata aktifitas katalase dalam batas normal karena pada kelompok ini tikus tidak diberi perlakuan.

Berdasarkan tabel 5.1. kadar rata-rata MDA darah kelompok kontrol positif adalah 5,605±0,391 nmol/ml dan kelompok kontrol positif merupakan kelompok dengan kadar rata-rata MDA darah tertinggi. Hal ini disebabkan pada kelompok kontrol positif diinduksi aloksan sehingga menyebabkan rusaknya sel beta pankreas. Rusaknya sel beta pankreas mengakibatkan terjadinya hiperglikemia yang mengakibatkan peningkatan produksi radikal bebas melalui tiga mekanisme, yaitu peningkatan aktivitas jalur poliol, glukoautooksidasi, dan glikasi protein. (Bartosikova et al, 2003;Syafril S, 2000). Peningkatan produksi radikal bebas yang menyerang membran sel akan menghasilkan MDA (Malondialdehid) dalam jumlah yang banyak. Hasil penelitian terhadap aktivitas katalase pada kontrol positif (tabel 5.3), didapatkan rata-rata aktivitas katalase kelompok kontrol positif adalah 4,954 ± 0,485 unit/mg. Hasil ini menunjukkan rata-rata aktivitas katalase yang terendah dibandingkan dua kelompok lainnya. Hal ini disebabkan sel beta pankreas sangat rentan terhadap kerusakan akibat radikal bebas karena sistem pertahanan antioksidan tubuh seperti katalase, Super Oksida Dismutase (SOD), dan Glutation peroksidase (Gpx) menurun pada keadaan diabetes (Srinivasan et al., 2003).

Berdasarkan tabel 5.1 pada kelompok perlakuan yang diinduksi aloksan dan diberi ekstrak mengkudu dengan dosis 500 mg/Kg BB/hari selama 12 hari, didapatkan rata-rata kadar MDA darah adalah 4,679±0,400 nmol/ml. Hasil ini lebih rendah dari kelompok kontrol positif yang diinduksi aloksan dan terdapat perbedaan bermakna dengan kelompok kontrol positif (p<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak mengkudu (500 mg/kg BB/hari) secara oral pada tikus DM selama 12 hari dapat menurunkan kadar MDA darah secara signifikan (Lampiran 4). Hasil penelitian pada kelompok perlakuan terhadap rata-rata aktivitas katalase (tabel 5.3.) adalah 6,314 ± 0,651 unit/mg. Hasil ini lebih tinggi dari kelompok kontrol positif dan terdapat perbedaan bermakna dengan kelompok kontrol positif (p<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak mengkudu (500 mg/kg BB/hari) secara oral pada tikus DM selama 12 hari dapat meningkatkan aktivitas katalase.

Penurunan kadar MDA darah dan peningkatan aktivitas katalase pada kelompok perlakuan di atas disebabkan pengaruh ekstrak mengkudu yang berfungsi sebagai antioksidan. Ekstrak mengkudu mengandung berbagai zat aktif yang berperan penting untuk antioksidan, yaitu vitamin A, vitamin C, Selenium dan Fe (Christina W,2005). Vitamin A dalam bentuk betakaroten berperan menangkap radikal bebas peroksi di dalam jaringan pada tekanan parsial oksigen yang rendah (Mayes PA, 2003). Vitamin C berperan menekan proses aktivasi jalur poliol dan glikasi protein pada penderita diabetes melitus sehingga produksi radikal bebas menjadi berkurang (Iqbal K, 2004; Yudkin, John S, 1992). Selenium berperan mengaktifkan glutation peroksidase yang dapat menetralisir hidrogen peroksida menjadi air sehingga dapat mengurangi radikal bebas (Kusnindar A, Mitra R, 2003). Fe berperan penting untuk mengaktifkan beberapa enzim di dalam tubuh termasuk enzim antioksidan. Semua antioksidan yang terdapat dalam ekstrak mengkudu di atas bekerja sinergis untuk meredam radikal bebas pada diabetes melitus. Peran katalase sebagai antioksidan adalah menguraikan H

menjadi H

O dan O

. Jadi kalau aktivitas katalase rendah maka H

akan diuraikan menjadi radikal hidroksil (·OH) yang sangat toksik terhadap jaringan.

Penelitian yang dilakukan Suweino dkk menemukan bahwa pemberian sari buah mengkudu pada tikus yang dipapari CCl

dapat menurunkan kadar MDA plasma dan MDA hati tikus dibanding kelompok yang dipapari CCl

tanpa diberi sari buah mengkudu (Suweino dkk, 2004). Penelitian yang dilakukan Padoli menemukan bahwa pemberian ekstrak buah mengkudu pada tikus dewasa yang diinduksi aloksan dapat menurunkan kadar MDA darah dan meningkatkan aktivitas Superoksida Dismutase (Padoli, 2007).

Berdasarkan penelitian peneliti dan peneliti di atas dapat disimpulkan bahwa stres oksidatif pada diabetes melitus dapat diatasi dengan pemberian ekstrak mengkudu yang dapat dilihat dari penurunan kadar MDA darah dan peningkatan aktivitas katalase kelompok perlakuan dibandingkan kelompok kontrol positif. Dengan demikian dapat juga disimpulkan bahwa ekstrak mengkudu dapat meredam aktivitas radikal bebas yang dipicu stres oksidatif akibat induksi aloksan.

IV. KESIMPULAN DAN SARAN

4.1.Kesimpulan

1. Terdapat pengaruh pemberian ekstrak mengkudu terhadap penurunan kadar MDA darah tikus DM yang diinduksi aloksan.

2. Terdapat pengaruh pemberian ekstrak mengkudu terhadap peningkatan aktivitas katalase tikus DM yang diinduksi aloksan.

3. Terdapat hubungan bermakna kadar MDA darah dan aktivitas katalase tikus antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok kontrol positif serta kelompok kontrol positif dengan kelompok perlakuan.

4. Tidak terdapat hubungan bermakna kadar MDA darah dan aktivitas katalase tikus antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok perlakuan.

4.2.Saran

1. Diperlukan penelitian lebih lanjut dengan dosis yang bervariasi agar didapatkan dosis optimal ekstrak mengkudu yang bermanfaat sebagai antioksidan.

2. Diperlukan penelitian lebih lanjut dengan rancangan Pre and Postest Control Design sehingga diperoleh hasil yang bermakna antara kelompok kontrol negatif dan perlakuan

3. Kandungan ekstrak mengkudu yang kaya dengan berbagai zat aktif, sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk memisahkan zat aktif tersebut dan pengaruhnya bagi kesehatan.

DAFTAR PUSTAKA

Askandar Tjokroprawiro,1998. Hidup Sehat dan Bahagia Bersama Diabetes. Edisi 2. Jakarta : Gramedia.

Bambang Setiawan dan Eko Suhartono, 2005. Stres Oksidatif dan Peran Antioksidan pada Diabetes Melitus. Majalah Kedokteran Indonesia, Vol 55, No 2, hal 87-90.

Bambang Setiawan;Eko Suhartono;Edyson;dkk, 2005. Uji Aktivitas Antioksidan Jus Buah Mengkudu (Morinda Citrifolia Linn) dan Perannya Sebagai Inhibitor Advanced Glycation End Products (AGEs) Akibat Reaksi Glikosilasi. Dalam Berkala Ilmu Kedokteran Vol.37, No. 1, 2005.

Bartosikova L, Necas J, Suchy V, et al.2003. Monitoring of antioxidative Effect of Morine in Aloxan-Induced Diabetes Melitus in the Laboratory Rat. ACTA VET. BRNO 2003, 72: 191-200.

Christina Winarti, 2005. Peluang Pengembangan Minuman Fungsional dari Buah Mengkudu (Morinda Citrifolia Linn). Jurnal Litbang Pertanian, 24(4), hal 149-153.

Dorland WA, Newman, 2002. Kamus Kedkteran Dorland. Terjemahan Huriawati Hartanto,dkk. Edisi 29. Jakarta : EGC.

Iqbal K, 2004. Biological Significance of Ascorbic Acid (Vitamin C) in Human Health – A Review. Pakistan Journal of Nutrition 3 (1) : 5-13.

Kusnindar Atmosukarto dan Mitri Rahmawati, 2003. Mencegah Penyakit Degeneratif dengan Makanan. Majalah Cermin Dunia Kedokteran. No 140, Jakarta : PT Kalbe Farma, hal 41-47.

Mayes PA, 2003. Struktur dan Fungsi Vitamin Larut Lipid. Dalam Biokimia Harper, Edisi 25. Jakarta : EGC. hal 615.

McLetchie, 2002. Alloxan Diabetes,A Discovery, Albeit A Minor One. JR Coll Physician Edinb 2002;32:1. Diakses dari www.rcpe.ac.uk/transplantscotland

Moningkey SI, 2000. Epidemiologi Diabetes Melitus dan Pengendaliannya. Jurnal Kedokteran Farmasi Medika No.3 Tahun Xxvi : 187-190

Nasir SM, 1988. Isolasi Senyawa-Senyawa Kimia Buah Mengkudu. Dalam buku Kimia dan Lingkungan. Penyunting Theresia Sita Kusuma. Penerbit : Pusat Penelitian Universitas Andalas Padang.

Solomon N, 2000. Noni Scientific Studies and Noni Traditional Uses. Diakses dari http://www.cnw.com/~timo/scien/scientific.html

Padoli, 2007. Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Buah Mengkudu (Morinda citrifolia linn) pada Tikus Dewasa yang Diinduksi Aloksan. Jurnal Universitas Airlangga.

Purnomo Suryohandono, 2000. Oksidan, Antioksidan, dan Radikal Bebas. Buku Naskah Lengkap Simposium Pengaruh Radikal Bebas Terhadap Penuaan dalam Rangka Lustrum IX FKUA 7 September 1955-2000.

Purbaya JR, 2002. Mengenal dan Memanfaatkan Khasiat Buah Mengkudu. Bandung : CV. Pionir Jaya.

Robert KM;Daryl KG;Peter AM;et al, 2003. Oksidasi Biologi. Dalam Buku Biokimia Harper. Edisi 25. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC. hlm 123.

Schteingart DE, 1995. Metabolisme Glukosa dalam Diabetes Melitus. Dalam (Price SA, Wilson LM,ed) Patifisiologi, Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit Edisi 4 Buku II. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC, hal 1111-1115.

Slamet Suyono, 2006. Diabetes Melitus di Indonesia. Dalam Ilmu Penyakit Dalam Jilid III.Edisi Keempat. Jakarta : Pusat Penerbitan Departemen Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, hal 1874-1875.

Suharmiati, 2003. Pengujian Bioaktivitas Anti Diabetes Melitus Tumbuhan Obat.Majalah Cermin Dunia Kedokteran No 140 tahun 2003. Diakses dari http : //www.kalbefarma.com pada tanggal 30 Januari 2007.

Sulistyowati Tuminah, 2000. Radikal Bebas dan Antioksidan. Majalah Cermin Dunia Kedokteran, No 128.Diakses dari http //:www.kimiafarma.com

Sunita Almatsier, 2003. Vitamin dan Vitamin Larut dalam Lemak. Dalam Buku Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Jakarta : PT Gramedia Pustaka Utama.

Suweino dkk, 2004. Kemampuan Sari Mengkudu (Morinda citrifolia ) dalam Menangkal Stress Oksidatif Akibat Pemberian CCl

pada Tikus. Prosiding Seminar Nasional dan Pra Kongres PBBMI pada 2 Oktober 2004 di Yogyakarta.

Syafril Syahbudin, 2000. Peran Radikal Bebas dan Antioksidan pada Proses Penuaan pada Diabetes Melitus. Naskah Lengkap Simposium Pengaruh Radikal Bebas Terhadap Penuaan dalam Rangka Lustrum IX Fakultas Kedokteran universitas Andalas Padang 7 September 1955-2000.

WHO Technical Report Series,2001. Diakses dari http //:www.who.com

Yudkin, John S, 1992. Effect of Vitamin C on Glycosylation of Protein. Diabetes 41 : 167-73.

https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=2&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwjEqaqErKDTAhXFnpQKHW6yA4gQFggpMAE&url=http%3A%2F%2Frepo.unand.ac.id%2F2420%2F1%2FARTIKEL_ILMIAH_husnil.doc&usg=AFQjCNEGR-uyd5MnFmah1SVbfPdGE6c_Rw&sig2=N1-_c2s47vTi-QJVsgawAA&bvm=bv.152180690,d.dGo

Cari Blog Ini

OASISAO

I.PENDAHULUAN

i. HASIL DAN PEMBAHASAN

Tabel 3.1. Kadar MDA Darah Tikus pada Ketiga Kelompok Penelitian

Tabel3.3. Aktivitas Katalase Tikus pada Ketiga Kelompok Penelitian

3.2. PEMBAHASAN

IV. KESIMPULAN DAN SARAN

Komentar

Posting Komentar